Development of novel peptide-based inhibitors of cancer-associated proteases

Abstract

Nell'ultimo decennio, i farmaci a base di peptidi hanno suscitato un crescente interesse grazie alle loro proprietà (riconoscimento selettivo del bersaglio, legame ad alta affinità e bassa tossicità) e applicabilità in ambito terapeutico. Nella prima fase del progetto sono stati prodotti e caratterizzati ventotto peptidi biciclici come inibitori dell’attivatore del plasminogeno urochinasi umano (huPA), una serina proteasi associata alla progressione del cancro e alle metastasi. I peptidi sono stati prodotti utilizzando la sintesi di peptidi in fase solida (SPPS), la reazione di biciclizzazione è stata condotta con il tri(bromometil) benzene (TBMB), purificati mediante HPLC e il loro peso molecolare confermato dalla spettrometria di massa. Il saggio enzimatico ha rivelato la presenza di molecole con Ki che vanno da 2,1 a 152,1 nM, che sono approssimativamente da 25 a 1 volte più potenti degli inibitori a base di peptidi dell'huPA precedentemente segnalati. Nella seconda parte del lavoro, sono state ottimizzate le condizioni per la modificazione selettiva dei peptidi presenti sulla superficie delle cellule di lievito. I peptidi sono stati prodotti in modo ricombinante e chimicamente modificati utilizzando diverse piccole molecole organiche. L'analisi della citometria a flusso ha consentito di identificare le condizioni chimiche ottimali pur mantenendo una buona vitalità cellulare.